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Leica AM TIRF MC

Total Internal Reflection Fluorescence Microscope 

全內反射螢光影像系統

　

世界第一台可全自動校正、調整全反射角度及方向，輕鬆得到高解析度全反射影像。( True Multi-color TIRF Microscope )

無疑的, Leica AM TIRF MC 的推出, 在學界, 已造成震撼. 因為 Leica AM TIRF MC 的創新設計, 可以創造使用者的最大價值, 讓使用者得到從所未有的超高解析的全反射螢光影像. 讓使用者得以探索細胞分子奧秘. 讓所有競爭廠商的設計, 汗顏落後.

因為 Leica AM TIRF MC 的優越設計, 我們膽敢驕傲的說出, 這是全世界最好的全反射螢光顯微鏡系統.

　

Flexibility

Reproducibility

Dynamics

Integration

　
Leica AM TIRF MC 光路設計與 TIRF 技術原理
TIRF (Total Internal Reflection Fluorescence) 利用雷射光入射角度達到全反射時，在介質表面形成的漸逝波（Evanescent Wave）做為激發螢光的能量來源，由於漸逝波的深度僅於表面 70~300 nm，較深的螢光物質便不會被激發，只有極靠近全反射面的樣本區域會產生螢光反射，大大降低了背景光雜訊干擾觀測標的，故此項技術廣泛應用於細胞表面物質的動態觀察。因此可觀察表面螢光表現而不受干擾 ( 例如細胞膜內外的動態觀察 )，為提高 Z 軸解析度之一項技術.

　

全內反射螢光顯微術 ( TIRFM) 是探索細胞基底的淺層接觸區域內的細胞生命活動現象的有效光學探測方法.，如細胞膜內蛋白質的動力學過程，基底附近的細胞骨架，細胞運動…等, 可應用於即時觀察單一肌漿球蛋白分子的運動、單一蛋白分子對之間的螢光共振能量轉移 (FRET),…..酶的轉譯，聚合物內單個分子的結構變化, 等離子體膜附近的神經分泌腺的顆粒運動.

　

Leica 獨家設計的 智慧型 TIRF Scanner 可精確自動調整雷射光 ( multi-color laser ) 入射角度，得到高解析度 TIRF 影像更為簡易。使用一般手動 TIRF 時，耗時費力調整卻無法得到正確入射角度，更換樣本後，又必須再次調整雷射角度。使用全自動 Leica AM TIRF MC，只要輕鬆按下滑鼠，便可以自動校正雷射光全反射角度，並可選擇四種不同的雷射入射方向，不再只能得到單一方向的 TIRF 影像，領先突破現有的研究範疇！

因為 Leica AM TIRF MC 可以簡易的得到超高解析的全反射螢光現象, 讓你專注於樣品研究, 而不是浪費時間在調整雷射或光徑角度.   Leica  AM TIRF MC 的獨家設計, 雷射光入射角度是全自動調整,  並可精確的控制 全反射的漸逝波深度 ( evanescent wave ), 可讓你一層一層觀察全反射螢光斷面影像, 可經確的探討細胞膜內外的動態螢光影像, 突破極俱研究價值的使用效益.
Leica AM TIRF MC 系統可控制全反射漸逝波（evanescent wave）深度，不同雷射波長，也可保持固定的漸逝波深度，更能增加實驗結果的可信度及再現性。漸逝波深度經由軟體可自由調整，得到不同漸逝波深度下的全反射螢光影像，提供了更多可能性的研究方向。

Leica AM TIRF MC 所追求的是創造出使用人員的實用效益. 讓使用者能快速與精確的得到研究成果.

　

　

Leica AM TIRF MC 的高度精密設計與穩定性, 從冰冷的儀器創造出令人激賞與熾手可熱的許多微觀的分子生物應用, 探索出分子的奧秘.
True Multi Color TIRF – 獨家設計

Leica  AM TIRF MC 提供 405nm, 488nm, 561nm, 和 633nm 四種不同波長雷射，使用 AOTF ( Acousto Optic Tunable Filter) 可在1ms內切換，搭配高速螢光轉盤，可進行 TIRF/ FRET 或 ratio image的應用。Collimator 可依不同波長調整雷射焦距，則切換不同波長時，也不用擔心雷射失焦，才能稱為真正的多波長全反射系統。

　

Leica 設計TIRF專用物鏡

有63X、100X 不同倍率可供選擇，NA 值最高可達1.47，並有 37℃ 溫度特別校正之鏡頭，最適合長時間觀察活細胞動態變化時，搭配培養系統使用。

  • TIRF - HCX PL APO 100X, oil
  • High numerical aperture: 1.46
  • Correction collar for 23°-37° C

  • Correction collar for coverslip thickness:

  • 0.14mm-0.22mm

　

TIRF 專用螢光濾鏡

 Leica TIRF MC 螢光濾鏡經過特別設計，避免TIRF 雷射光通過濾鏡時產生不必要的干擾及折射。

雷射保護裝置

顯微鏡和培養箱上均有感應快門，一但察覺未完全關閉，雷射強度自動減弱，充分保障使用者安全

FEATURES

BENEFITS / ADVANTAGES

One Multi Laser box Double staining and flexibility in Fluoro-chromes selection
One single multimode fibre Easy alignment, saves training time
Fast AOTF control Fast image acquisition with wavelength change and intensity adjustment
Fully automated TIRF alignment Easy TIRF set up and handling
Precise setting of penetration depth for TIRF New experiments possible to investigate dynamic processes in cells
Setting of 4 different Azimuth positions for TIRF

Optimised TIRF images by adjustment of the evanescent field direction to sample conditions

Special colour, temperature and cover slip thickness corrected optics High flexibility in specimen preparation
TIRF sensor chip (refractive index, posi-tion of reflected laser beam) Easy automated handling
Special optics and objective for correction of colour aberration No color aberration, no fringes
1.46 NA Plan Apo Objective with tem-perature control and coverslip correction High Flexibility in sample preparation combined with highest resolution
Intelligent compensation of penetration depth shift with wavelength changes , Multi colour TIRF with constant penetra-tion depth
SW supported FRET (Kit and wizard) FRET for TIRF with easy set up
　 　
　

　

應用範圍：

-- Colocalization

-- Endocytosis/ Exocytosis

-- Vesicle transport

-- Membrane and receptor recycling

-- Focal adhesions

-- Cytoskeletal dynamics

-- TIRF/ Photoactivation

-- FRET and TIRF

-- Combination of TIRF - AFM

Main Application fields:

  • Structure and dynamics at or near (100-200 nm) coverslip/cell interface (mem-brane, cytoskeleton).
  • Exo-, Endocytosis (intracellular transport of vesicles. Spatio-temporal dynamics; Synapses)
  • Protein-Protein Interactions and Dynamics (?Intracellular molecular Machinery?
  • Single molecule visualization
  • Cell-cell Interaction
  • Focal adhesions, cellular movements

　

TIRF Membrane Research

View dynamic structures and events

  • Research of molecular interactions at cell membranes, of proteins and receptors involved in transport mechanisms, requires fast switching of the excitation wavelength. With Leica Multi-Color TIRF, wavelengths are switched in a few ms without alteration of the penetration depth. The system’s fast control and high image recording rate of up to 30 frames per second is also an advantage for FRET analysis. Using the new FRET wizard, experiments can be conducted with ease and fully evaluated automatically.

  • If alternating wavelengths are required in the widefield light path of the TIRF module, Leica’s fast filter wheels can be used. Switching times of approximately 30–50 ms are easily achievable

TIRF Single Molecule

Explore the world of single molecules

  • With the Leica TIRF system it is easy to image single molecules close to the cell membrane.

  • Typically, a powerful objective’s resolving power in the z axis is physically limited to approximately 400–500 nm by the wavelength of the light used. This physical restriction is eliminated by the high accuracy of the TIRF excitation of ~ 100 nm in the z axis. Even interactions of single molecules, the kinetics or co-localization of molecules can be visualized and measured with Leica’s highly sensitive TIRF system.

  • The constant penetration depth when switching the laser lines is a key prerequisite for using multiple fluorophores. Due to the excellent signalto-noise ratio, the entire dynamic range of this high-performance camera can be exploited. Even with weak fluorescent signals, the EMCCD camera provides highest resolution images while ensuring the uncompromising sensitivity essential for the gentle treatment of light-sensitive specimens

TIRF Vesicle Transport

High resolution and minimum light stress

  • Due to strong background fluorescence, vesicle transport studies require an optimum signal-to-noise ratio. At the same time, stability for experiments lasting several hours or days is a must. Vesicle transport experiments are made simple with the Leica AM TIRF MC.

  • With the addition of Leica’s special climate chamber to the TIRF system, temperature and CO2 levels remain constant.

  • The Leica AF6000 multidimensional fluorescence workstation with intelligent application software and hardware provides accurate results. For brilliant photographs of vesicle transport investigations, a high-sensitive and high-speed EMCCD camera can be used.

　

Leica AM TIRF MC at a glance:

  • Integration of four wavelengths 405 nm, 488 nm, 561 nm and 635 nm with fast AOTF control

  • Correction of the penetration depth when switching wavelength

  • Combination of TIRF and fast FRET analysis

  • Highest transmission of all optical TIRF components for maximum TIRF imaging speed and brilliance

  • Fast image recording of up to 30 fps with simultaneous change of wavelength

　
Leica AM TIRF MC 不僅是一套 TIRF, 更是一套全功能的活細胞影像擷取分析系統, 也市一套高階的螢光顯微鏡系統. 可連結到 Leica TCS SP5 II Confocal Microscope. 創造許多無限的可能.

Technical data

Inverted Fluorescence Microscope 

    1. Leica DMI 6000
    2. Motorized objective nosepiece
    3. Manual/Motorized specimen movement (xy)
    4. Motorized focusing (z)
    5. Automated CCIC
    6. Automated Fluorescence with FIM, IFW and new BGR cube
    7. EL6000 light sources

 MC Laser Box (LIS)

    1. 405 nm -> 25 mW,
    2. 488 nm -> 10 mW,
    3. 561 nm -> 20 mW,
    4. 635 nm -> 18 mW

Laser safety concept (Laser system class 1)

    1. Multimode fibre coupling
    2. Available with or without 405 nm

Laser

    1. Ar ion Laser
    2. CW 457nm, 488nm, 514nm
    3. 100 mW max. Energy
    4. TEM00 Mode

Laser safety concept (Laser system class 1)

    1. TIRF MC Module
    2. Motorized optical beam scanning for precise positioning
    3. Motorized auto alignment
    4. Motorized settings of penetration depth
    5. Motorized setting of evanescent field direction

Software

    1. AF6000 platform with integrated TIRF control
    2. TIRF contrasting method
    3. TIRF auto alignment
    4. TIRF time lapse function
    5. Automated Correction of penetration depth with wavelength change
    6. TIRF Filter cubes

　
Leica 與其它廠商的重要差異在哪裡 ?
　 Leica 其他廠商
TIRF 是否會自動校準 ? 自動校準 無此設計, 耗時費力
自動校准與控制不同波長雷射光源的穿透深度 自動化 一般都無此設計
自動調整全反射角度及方向 可以 一般都無此設計
使用的簡易性 簡易 複雜
TIRF 影像的解析 高解析 一般 TIRF 影像都難以達到使用者的期待
一體化顯微鏡培養箱 有 無
TIRF 長時間影像擷取 ( 或, 連續光切片與重建 ) 下執行 FRET 可以 無
整體操控再線性 良好 不良
即日起, 本公司備有全套 Leica AM TIRF, 歡迎您攜帶樣品來公司做測試.

如要學習 TIRF 技術, 我們也歡迎您來公司參加短期解說及應用研習.
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