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Leica
LMD 6000
雷射顯微細胞組織擷取系統
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Leica
AS LMD
雷射顯微細胞組織擷取系統
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| Leica
AS LMD 雷射顯微細胞組織擷取系統
( Laser
Micro-Dissection System ),
是微電腦全自動控制的雷射顯微細胞組織擷取系統,.
採用紫外光雷射
( UV Laser ) 掃描切割擬取樣的樣品邊緣
( 由滑鼠描繪
), 雷射光完全沒有碰到樣品本身,
也不會產生高熱影響樣品.
切割與取樣一次完成,
完全無接觸污染.
使用上最簡單,
是最省時與最節省使用成本的系統.
同時, 也是使用效益最高的系統.
使用LMD
技術, 完成切割取樣的樣品會依重力掉落方式,
掉落到指定的
PCR ( RT-PCR ) 蓋子上.
由於雷射光束口徑與焦距的精密控制,
切割光束得以精密掃描控制,
再加以樣品薄膜的突破,
使切割樣品從固定染色組織到冷凍切片組織
( Cryo-Microtome, Vibratome ), 精細到單一細胞的擷取.
配合螢光標定取樣技術,
以及,
高倍鏡頭
100x OIL , 更可擷取特定單一活細胞與組織,
供分子基因研究,
如,
RNA, DNA, Protein 研究.
在台灣,
已有台大, 陽明, 成大, 三總,
國衛院等單位, 相繼使用中.
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Leica
AS LMD |
雷射顯微細胞組織擷取系統 |
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Leica
DM LA |
微電腦控制正立螢光顯微鏡 |
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Leica
AS LMD Laser Micro-Dissection System 雷射顯微細胞組織擷取系統 |
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| 全世界唯一專利的
雷射掃描切割擷取技術.
( Laser Beam Scanning and Cutting ).
重力掉落取樣.
一般染色切片,
新鮮組織切片,
冷凍切片,
活細胞,
單一細胞,
染色體都可輕易的切割取樣,
完全無接觸污染.
與 QIAGEN
技術合作,
提供 RNA-kits.
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雷射光束依照所使用鏡頭倍數,
自動調整切割光束口徑
( 小至單一細胞的切除
) - 雷射沿著滑鼠軌跡掃描切割 |
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唯一使用微電腦控制的
正立 UV-顯微鏡
(
不是使用倒立顯微鏡,
獨家UV
專用鏡頭
).
微電腦控制
UV-雷射光束
掃描切割
(
不是移動載物檯
LMD
UV-鏡頭 :10x,
20x, 40x, 63x, 100x.
).
電控
5-孔式
(
PCR 試管
或
LightCycler
RT-PCR 試管蓋
) 樣品收集檯.
( 使工作自動化
) ,
視窗版系統軟體,
簡易使用,
升級簡易.
( 系統自動校準,
軟體可從網路傳輸
) 可升級為多重切割 (
Multiple cutting ).
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切割可應用於顯微鏡的
明視野,
螢光.
可直接透過顯微鏡看到
PCR 試管內取得的切割樣品
, 適用樣品可達單一活細胞,
染色體片段,
並可使用
100x 油鏡.
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新一代的試片膜
( Leica PEN-Foil )
及
QIAGEN RNA-kits :
1.
試片膜
可封片於一般
載玻片
2.
試片膜
可封片於一般
蓋玻片
( 0.17 – 0.13
mm ) ,
供高倍由鏡使用,
100x / 1.30 U-V-I OIL.
3.
試片膜
可置放於徠卡的
試片架
( Mounting Frame ), 無任何玻片,
可直接切割,
也可培養
活細胞.
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已完成切割的樣品,
以
重力自然掉落
方式收集至
PCR 試管
(切割與取樣,
一次完成
無接觸污染
) |
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| 範例之一 (
Journal of Neuronscience Methods 131 ( 2003 )
83-91 ) |
| Quantification
of layer-specific gene expression in the
hippocampus effective use of laser microdissection
in combination with quantitative RT-PCR. Guide J.
Burbach, Doris Dehn, Domenico Del Turco, Thomas
Deller, Institute of clinical Neuroanatomy, Johann
Wolfgang Goethe-University, Germany. |
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| 獨家設計的雷射切割專用物鏡 |
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Leica HCX PL Fluotar LWD 40x/0.60 CORR PH2 XT
0-2 / C / 0.22, Objective |
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Leica HCX PL Fluotar LWD 63x/0.70 CORR PH2
XT / 0.1-1.3 / C 1,63-2,83 |
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Leica HCX PL Fluotar 150x/0.90 0/C |
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特點 : |
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high UV transmission &
high image quality, special Leica correction
collar to get the highest image quality even
with uncovered sections on PEN membrane only
! |
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ensures a very sharp cut even
through thick sections or tissue with low UV
absorption (like e.g. unstained plant
material) |
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you will get a cutting line of
just 2 µm with 40x and 1 µm with
63x |
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Select your single cells easy
and precise |
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see image: single cell
selection from rat brain, IHC staining
40x XT |
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Ultra
long working distance |
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| Protocols
( 相關應用資料參考
) |
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RNeasy
Micro Kit
For isolation of
concentrated total RNA from
small amounts of tissue or
small numbers of cells [more] |
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QIAamp
DNA Micro Kit
For purification of genomic
and mitochondrial DNA from
small amounts of fresh or
frozen blood, tissue,
forensic samples, and dried
blood ... [more] |
|
QIAGEN
Reverse Transcriptases
QIAGEN Omniscript and
Sensiscript Reverse
Transcriptases are unique
recombinant enzymes with a
high affinity for RNA,
providing highly specific
and sensitive ... [more] |
|
HotStarTaq
DNA Polymerase
HotStarTaq DNA Polymerase, a
modified form of QIAGEN Taq
DNA Polymerase, provides
high specificity in
hot-start PCR. [more] |
|
QuantiTect
PCR and RT-PCR System
QIAGEN QuantiTect PCR Kits
(for PCR and two-step RT-PCR)
and QuantiTect RT-PCR Kits
(for one-step RT-PCR)
provide accurate real-time
quantification of ... [more] |
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| 更多的物鏡供選用
: |
| UVI
6.3x / 0.13 Microdissection |
| HC PL FLUOTAR
10x / 0.30
/ Coverglass: - / ICT upright: K2+D1
/ ICT invers: S1=K11,S23=K3(K11),
S70=K6(K3),Obj.=D1(D) ICR: D1(D)
/ thread: M25 / FWD: 11.0 |
| HCX
PL FL L 40x/0.60 CORR TX 0-2/C,
0.22,
Objective |
| HCX APO
100x / 1.30 Oil
U-V-I / Coverglass: 0.17 / ICT
upright: K4+D or K9+D
/ ICT invers:
S1=K4-K12,S23=K10,S70=-,Obj.=D /
ICR: D(D1) / thread: M25 / FWD: 0.12 |
| HCX PL FL L
63x / 0.70 CORR XT |
| HCX PL FL L
63x / 0.70 CORR PH2
0.1-1.3/C
1,63-2,83 |
| HCX PL APO U-V-I
40x / 0.75
Coverglass: 0.17 / ICT upright:
K3+D(K6+D1) / ICT invers:
S1=K3(K6),S23=K6(K8),S70=K8,Obj.=D(D1) / ICR:
- / thread: M25 / FWD: 0.28;with high
transmission in UV, visible and IR light |
| HC
N PLAN L 20x / 0.40 CORR 0-2/c |
| HCX
PL FL L 40x / 0.60 CORR TX 0-2/C,
0.22,
Objective |
| HCX PL FLUOTAR
150x / 0.90 0/C |
| HC
C PLAN 4x / 0.10
/ Coverglass: - / ICT upright: - /
ICR: - / thread: M25 / FWD: 26.2 |
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| 一些重點比較
( 採用客戶觀點作比較 ) |
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廠牌 |
Leica
( LMD ) |
|
Arcturus
( LCM ) 及其他廠牌技術 |
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技術簡稱 |
Laser
Micro-Dissection ( LMD ) |
|
Laser
Capture Microdissection ( LCM ) |
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切割與取樣
應用技術
? |
切割
: ( UV laser ) |
|
熱熔
: ( IR laser ) |
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切割 |
利用聚焦的紫外光雷射光束自動掃描切割所須的樣品邊緣,
完全無接觸到擬取得的樣品,
取樣時,
載物台固定,
光束自動掃描切割.
(
其他廠牌,
如果使用
UV-雷射,
都是移動載物檯,
無法做雷射掃描切割
)
|
|
利用紅外光雷射,
產生
90
度以上的高熱,
熔解黏著薄膜的樣品,
並以黏取方式取樣.
取樣時,
光束固定不動,
必須將載物台移動,
也必須將雷射一點一點打到整區的樣品區.
樣品必須特殊處理至乾燥. |
| |
取樣 |
重力自然掉下取樣
: ( Gravity ), 已完成切割的樣品,
完全無須借助外力,
以重力自然掉下方式落至PCR
蓋子. |
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黏取取樣
( 經常產生黏錯現象
)
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顯微鏡
? |
LEICA
DM LA 微電腦控制式高階研究級的正立顯微鏡
( UV-專用,
具有螢光裝置 ).
配有 UV 專用高解析物鏡
(
10x, 20x, 40x, 63x, 100x )
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Olympus
簡易型的倒立顯微鏡
IX50
( LCM 技術,
其雷射光是利用
Condenser-聚光鏡 由上往下到樣品,
所以,
無法使用高倍油鏡 ),
瑾配備低階低倍鏡頭 (
低 NA
鏡頭,
低光學解析 ) |
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載物台 |
電控式,
配有 5 孔式
PCR 樣品台.
供指定取樣裝至於指定的 PCR
試管上. |
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一般簡易機械載物台. |
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試片膜 |
低成本 |
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高成本 |
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活細胞培養薄膜
( PEN Foil )
蓋玻片式
(可供100x鏡頭使用)
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