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Fluorescence Filter System 

顯微鏡螢光濾鏡

我們因應您的螢光應用, 提供最佳螢光觀察與取像的解決方法. 螢光技術的確是一門專業技術, 洽當的規劃, 往往讓您事半功倍.

美嘉儀器公司的專業團隊, 在螢光影像的觀察及影像擷取, 都有多年的豐富經驗, 可以提供螢光濾鏡及螢光影像系統, 供所有廠牌顯微鏡使用 ( Leica, Zeiss, Nikon, Olympus ) 歡迎您的洽詢.

　
　
顯微鏡螢光技術 ( Fluorescence Microscopy )

激發光源 ( Excitation sources )
一般顯微鏡都採用汞燈 50 W, 或 100 W, 也有使用 Xenon 燈源 75W, 125W, 175W, 250W. 此外, 我們也經常使用先進的的激發光源, 以利波長選擇, 及, 調整激發光波的強度, 以利螢光染劑及樣品的長時間應用. 例如 :
Leica EL 6000 外接式光纖傳導螢光光源  : 光纖傳導, 鐵氘燈源.
單光儀 ( Monochromator ), 提供單一波長, 連續掃描, 切換波長.
超高速波長切換裝置 ( Galvanometer-driven wavelength switcher, Sutter DG4 ), 高速切換波長.
冷卻式二極體光源 ( CoolLED Light source ) : 二極體光源, 可快速切換或開關, 無須附加快門及減光濾鏡.
雷射光源 ( Laser ), 提供單一波長, 光照品質優.
調控強度可使用 ND filter 或 AOTF ( Acousto optical tunable filter ).
此外, 輔以規劃快門 ( Shutter ) 設計, 便能控制光照時間.
Sutter Lambda-10 Monochromator Sutter DG4 Laser system

上圖 : 藍色: 激發光譜, 綠色 : 分光, 紅色 : 螢光釋放光譜 ( 取自 Chroma / USA )

　
有效的激發, 分光, 及 光譜鑑別蒐集, 是必須依賴您的樣品及螢光染劑而決定之. 如上圖, 左邊圖示, 因為 Emission filter 的設計欠佳, 以致產生螢光重疊雜訊. 右圖圖示, 表示適當正確的 Emission filter 規劃, 產生紅綠光譜分離的影像.
　

活體螢光蛋白 ( Living color protein ) 的光譜都極為接近, 在使用上, 要謹慎處理選擇濾鏡波長的規劃. 取自 Clontech.

螢光濾鏡 ( Fluorescence Filter )

每一組螢光濾鏡基本上都包括了三個鏡片 

1). 激發光濾鏡 ( Excitation Filter )

因為特定的染劑需要使用特定波長範圍的光來當作激發光源 ( 才不致影響到其它不想要檢視的物質被激發 ) 而一般燈泡式的光源 ( 如 Hg 50W, Hg 100W, Xe 75 W ), 所產生的光, 都含蓋全波長 ( 300 – 1200 nm ) , 所以, 必須使用激發光濾鏡來篩選激發螢光染劑所須的光譜範圍 ( 可為 Long-pass, Band-pass, Short-pass ). 激發光濾鏡是以特殊的鍍膜, 來產生可篩選波長的功能. 例如 BP 450 – 490 nm, 即是僅讓 450 – 490 nm 間的光通過, 用以激發 FITC 染劑.  

2). 分光鏡 ( Dichromatic Mirror 或者 Beam Splitter )

將較短波長的激發光反射至樣品. 例如 RKP 510 nm, 即是, 510 nm 以下的光反射至樣品, 然而, 510 nm 以上的光可通過. 

3). 釋放光濾鏡 ( Emission Filter 或者 Suppression Filter, Barrier filter ) 受檢樣品中的特定染劑及其它物質被激發後, 所有被激發的物質都釋放出來較長波長的螢光, 然而螢光僅能在釋放光濾鏡所選定的特定波長範圍內通過, 此通過的螢光即是我們所要觀察的螢光影像. 例如 : LP 510 nm, 即是, 螢光光譜超過 510 nm 的, 都能通過濾鏡供觀察, 低於 510 nm 的螢光則被阻擋看不到.
目前, 全世界只有 Leica TCS Confocal Spectral Microscope 能將此三個關鍵技術突破為完全微電腦控制的連續可調, 這是顯微鏡專家的夢想, 今日, 已成真.   詳細請參考 Leica TCS 系列共軛焦顯微鏡.
Leica 螢光濾鏡表  ( 訂購時, 請告知 Leica 顯微鏡機型 或 Filter wheel 機型 )

( 如需其他特定濾鏡, 或, 特定用途, 或, 使用於其他廠牌顯微鏡上, 請洽本公司技術人員 )
Filter Cube Excitation Range Excitation Filter Dichromatic Mirror Suppression Filter
A UV BP340-380 400 LP 425
A4 UV BP 360/40 400 BP 470/40
Analyzer cube - - - Analyzer
BFP/GFP UV/blue BP 385/15;485/20 420;510 BP 460/20;537/45
B/G UV blue 410/15;490/20 430;500 455/20;535/45
B/G/R UV BP 420/30;495/15;570/20 415;510;590 BP 465/20;530/30;640/40
B/R UV green 420/20;530/45 435;565 465/30;615/70
CFP violet / blue BP 436/20 455 BP 480/40
CFP/YFP violet / blue BP 436/12; 500/20 445;515 BP 467/37;545/45
CFP/YFP/DsRed violet / blue BP 436/8;495/12;580/20 445;510;595 BP 460/25;535/35;630/55
CY3/CY5 546 nm
CY3/TRITC 531 nm
CY5 HQ 620/60x Q 660 LP HQ 700/75
D UV / violet BP 355-425 455 LP 470
DAPI/FITC/CY3 400 nm
DHE D 335/20x 365 D 405/40
E4 violet / blue BP 436/7 455 LP 470
Empty system - - - -
Filter system ICR - Pol + MgF - Analyzer
FITC/CY3/CY5
FITC/Texas Red
FI/RH blue BP 490/15;560/25 500;580 BP 525/20;605/30
FURA2 w/o 72100bs HQ 540/50m
GFP blue BP 470/40 500 BP 525/50
GFP CY2 BP 437/30 495 BP 520/35
GFP (Narrowband) D 480/20x 505 D 520/20
G/R blue BP 490/20;575/30 505;600 BP 525/20;635/40
H3 violet / blue BP 420-490 510 LP 515
I3 blue BP 450-490 510 LP 515
JP1 D470/20x 490 D510/20
JP2 D 510/20x 530 D 560/40
K3 blue BP 470-490 510 LP 515
L5 blue BP 480/40 505 BP 527/30
M2 green BP 546/14 580 LP 590
N2.1 green BP 515-560 580 LP 590
N3 green BP 546/12 565 BP 600/40
Pol - Polariser Neutral Analyzer
Qdot 605 E460 SPUVv2 475 DCXRU D 665/20
Red GFP green BP 546/12 560 BP 605/75
S Aqua violet/blue D 436/20x 455 LP D 480/30
S Blue violet D 405/10x 425 LP D 460/50
S Blue/Aqua violet HQ 405/20x 425 DCXR HQ 430 LP
S FRED red HQ 630/20x Q 649 LP HQ 667/30m
S Gold green HQ 546/11x Q 555 LP HQ 575/30
S Green blue HQ 500/20x Q 515 LP HQ 535/30
S Orange green HQ 546/12x Q 560 LP HQ 585/40
S Red green D 577/20x 595 LP D 630/30
TX2 green BP 560/40 595 BP 645/75
Y 5.5 red HQ 682/12x Q 697 LP HQ 721/42m
Y3 green BP 545/30 565 BP 610/75
Y5 red BP 620/60 660 BP 700/75
Y7 red BP 710/75 750 BP 810/90
YFP blue BP 500/20 515 BP 535/30
YFP2 BP 500/24 520 BP 542/27
+ specially for multi-parameter fluorescence
BP = bandpass filter
LP = longpass filter
0 = to be fitted by customer
* Filter Cube after Ploem
** fluorescent protein
　

螢光濾鏡選配參考 ( 螢光染劑 vs Leica 螢光濾鏡 )　
　

螢光濾鏡選配參考 ( 應用 及 染劑  vs Leica 螢光濾鏡 )　

工業材料 的螢光應用
半導體 ( 晶圓, 液晶, 電子材料 ) 的螢光應用

螢光應用 : 建議使用 Leica 物鏡

　

其他 Multi-Band filter system ( Dual-band, triple-Band ) 濾鏡

( 如需其他特定濾鏡, 或, 特定用途, 或, 使用於其他廠牌顯微鏡上, 請洽本公司技術人員 )

　
其他 GFP 螢光濾鏡選配參考表

( 如需其他特定濾鏡, 或, 特定用途, 或, 使用於其他廠牌顯微鏡上, 請洽本公司技術人員 )
Chroma Singale-Band Filter Set ( 單一 GFP 觀察與取像　)
1 wtGFP ( LP ) 　425/40 460 475 LP 　
2 wtGFP ( BP ) 　425/40 460 500/40 　
3 Blue GFP 　390/20 420 460/50 　
4 Narror band ex/em 　480/20 490 520/20 　
5 JP1 ( for EGFP when used with YGFP ) 　470/20 490 510/20 　
6 JP2 ( for EGFP when used with YGFP ) 　510/20 530 560/40 　
7 Blue GFP-II 　380/30 420 460/50 　
8 Sapphire / UV-GFP 　395/40 425 510/40 　
9 Cyan GFP 　436/20 455 480/40 　
10 wtGFP ( BP em ) 　425/60 470 510/40 　
11 wtGFP ( LP em ) 　425/60 470 480 　
12 FITC / EGFP ( BP em ) 　480/40 505 530/50 　
13 FITC / EGFP ( LP em ) 　480/40 505 510 LP 　
14 wtGFP ( BP em ) 　450/50 480 510/50 　
15 wtGFP ( LP em ) 　450/50 480 485 LP 　
16 Endow GFP ( BP em ) 　470/40 495 525/50 　
17 Endow GFP ( LP em ) 　470/40 495 500 LP 　
18 Narrow Band ex / em 　480/20 495 510/20 　
19 Piston GFP 　470/40 495 515/30 　
20 Yellow GFP ( BP em ) 　500/20 515 535/30 　
21 Yellow GFP ( LP em ) 　500/20 515 520 LP 　
22 DsRed 　545/30 570 620/60 　
23 DsRed 　546/12 560 605/75 　

FRET ( Fluorescenec Resonance Energy Transfer ) 應用濾鏡組合

24 BFP / GFP ( FRET - BP ) 　380/30 425 520/50 　
25 CFP / RsDed FRET 　436/20 455 620/60 　
26 CFP / Topaz FRET 　 　 　 詳細資料請洽公司
27 Cameleons 2 　 　 　 詳細資料請洽公司
28 LS / P Cyan / Yopaz ( Dual ex, Single em ) 　 　 　 詳細資料請洽公司
29 pH sensitive GFP 　 　 　 詳細資料請洽公司
30 BFP / GFP 　 　 　 詳細資料請洽公司
32 CFP / YFP 　 　 　 詳細資料請洽公司
32 CFP / DsRed 　 　 　 詳細資料請洽公司
33 GFP / DsRed 　 　 　 詳細資料請洽公司

多重螢光觀察與擷取濾鏡組合 ( Multi-Band ) 適用 Ex / Em 兩組螢光濾鏡轉盤, 分光鏡固定於顯微鏡上.
34 EGFP and YFP 460/20,

523/20

 　 500/20,

568/50

 　
35 CFP and YFP 　 　 　 詳細資料請洽公司
36 CFP and YFP 　 　 　 詳細資料請洽公司
37 BFP / EGFP 　 　 　 詳細資料請洽公司
38 UVGFP ( Sapphire ) and CFP, YFP v1. 　 　 　 適用 Hg 50W, Hg 100W
39 UVGFP ( Sapphire ), and CFP, YFP v2. 　 　 　 適用 Hg 及 Xenon illuminator
40 BFP / YFP 　 　 　 詳細資料請洽公司
41 CFP / YFP / DsRed 　 　 　 詳細資料請洽公司
42 GFP / DsRed 　 　 　 詳細資料請洽公司
43 CFP / YFP / Cy5 　 　 　 詳細資料請洽公司
44 CFP / YFP / Cy5 　 　 　
45 BFP / GFP and DsRed

( sequential imaging )

 　 　 　
46 BFP ( or DAPI ) / CFP / YFP and DsRed ( or Texas Red )

( sequential imaging of Blue,  Cyan and Yellow GFPs and DsRed, for Hg excitation )

 　 　 　
47 CFP and DsRed

( sequential imaging of Cyan CFP & DsRed, for Hg and Xenon excitation )

 　 　 　
48 Microscope filter-wheel 　 請告知顯微鏡之 廠牌, 機型,  燈源種類.
49 Sutter Filter wheel

　Lambda-10

 請告知濾鏡尺寸　
50 LUDL filter wheel 　 請告知濾鏡尺寸
51 Sutter DG-4 　 請告知濾鏡尺寸

52

 其他活體螢光蛋白應用 請告知所指定波長 ( 及, 螢光蛋白與應用　)
FRET 技術
Application :

Conformational changes of macromolecules (proteins)

§ Interactions like association or dissociation of macromolecules (proteins, protein subunits, DNA oligomers)
§ Changes in concentration of small metabolites (cAMP) or ions (calcium)
§ Membrane potential changes
It is a process in which an excited fluorophore ( the donor ) transfers its excited state energy to a light absorbing molecular ( the acceptor ). This transfer of energy is non-radiative, due to a dipole-dipole interaction between the donor and the acceptor. ( 右圖 : T. Zimmermann )

E-CFP / E-YFP for live cell imaging. ( FRET ) - 常用組合

CFP-Cy3, Alexa 488-TRITC, Cy3-Cy5 for fixed specimen. ( FRET )  - 常用組合

Donor 及 Acceptor 間距 2 - 7 nm., 發現 FRET 現象.
建議參考文獻 :
•Gadella T W J, Van der Krogt G N M, Bisseling T: GFP-based FRET microscopy in living plant cells. Trends Plant Sci. (1999) 4(7): 287-291
•Wouters F.S., Verveer P.J. & Bastiaens P.I.H (2001) Imaging biochemistry inside cells. Trends Cell Biol. ,11(5):203-11.
•Xia Z., Liu Y.: Reliable and global measurement of fluorescence resonance energy transfer using fluorescence microscopes. Biophysical Journal, Vol. 81, October 2001, 2395-2402
•Zimmermann T. et al.: Spectral imaging and linear un-mixing enables improved FRET efficiency with a novel GFP2-YFP pair. FEBS letters (2002), 245-249
•Lippincott-Schwartz, J., Snapp, E. and Kenworthy, A. K.. Studying protein dynamics in living cells. Molecular Cell Biology, 2, 444-456, 2001
螢光離子流影像應用　濾鏡組合 ( Fluorescenec Ion Imaging Filter Set )
請選用下列濾鏡組合 ( 請洽本公司專業人員 )
Quantum Dot ( QdotTM 是美國 Quantum Dot Corp. 公司的專利與註冊名稱 - www.qdots.com  ) 是創新的奈米科技, 新一代的螢光試劑, 目前主要產品有 Qdot Nanocrystal,  Qdot Bioconjugate, Qdot Microsphere, 因為光譜的專一性, 以及, 不會衰減, 螢光強度極為鮮明亮麗, 所以, 一些應用已展開, 如 In vivo Fluorescence Imaging, Multiphoton in vivo fluorescence imaging, Immunofluorescent labeling of breast cancer markers, Multiplexed SNP genotyping using the QbeadTM system: a quantum dot-encoded microsphere-based assay, Long-term multiple color imaging of live cells using quantum dot bioconjugates, Targeting Cell Surface Receptors with Ligand-Conjugated Nanocrystals, Cell Motility and Metastatic Potential Studies Based on Quantum Dot Imaging of Phagokinetic Tracks.... 等. 

建議使用 Leica TCS 雷射掃描共軛焦光譜顯微鏡, 能有效分離所有螢光染劑的光譜.

　
本公司進口美國 Chroma 螢光濾鏡, 提供您先進的研究.

上圖圖示 : Qdot 525 - 20 nm emission filter, spectral chart from Chroma / USA.
請選用下列濾鏡組合 ( 請洽本公司技術人員 )
1. Chroma - Qdot 525 - 20, 40 nm Emission filter
2. Chroma - Qdot 565 - 20, 40 nm Emission filter
3. Chroma - Qdot 585 - 20, 40 nm Emission filter
4. Chroma - Qdot 605 - 20, 40 nm Emission filter
5. Chroma - Qdot 655 - 20, 40 nm Emission filter
6. Chroma - Qdot Multiple Emission Set

實體顯微鏡

專用螢光濾鏡

　

 Leica FL 模組, Leica MZFL-III, Leica MZ16 FA, Leica L5 FL. Leica Fluo-Combi
其他廠牌 : Nikon, Olympus, Zeiss
標準螢光濾鏡模組選配 ( 其他非下表所列濾鏡, 請洽本公司技術人員 )　
GFP1 GFP Filter Set  Ex : 425/60 nm Em : 480 nm
GFP2 GFP-Plus Filter Set  Ex : 480/40 nm  Em : 510 nm LP
GFP 3 GFP-Plant Filter Set  Ex : 470/40 nm,  Em : 520/50 nm
UV UV Filter Set  Ex : 360/40 nm  Em : 420 nm LP
V Violet Filter Set  Ex : 425/40 nm  Em : 475 nm LP
B Blue Filter Set  Ex : 470/40 nm  Em : 515 nm LP
G Green Filter Set  Ex : 546/10 nm  Em :  590 nm LP
CFP EX ( 436/20 nm ) : EM ( 480/40 nm )
YFP EX ( 510/20 nm ) : EM 560/40 nm )
DsRed EX ( 560/40 nm ) : EM ( 610 LP nm )
Texas Red EX ( 545/12 nm ) : EM ( 620/60 nm )
　 Specified Filter Set,  specified Ex,   specified Em
　 Filter Holder, empty. MZ FL III
Leica L5 FL 專用螢光濾鏡 ( 標準 )
Blue ( Ex 450/64, Em 550/54 nm )
Green ( Ex 450/64, Em 550/54 nm )
非顯微鏡用螢光濾鏡, 請洽本公司技術人員.
美嘉儀器股份有限公司 Major Instruments Co., Ltd.
台北總公司 : TEL : 02-2808-1452  FAX : 02-2808-2354  維修中心 : 02-2808-2353   高雄辦事處 - TEL : (07) 725-8177  FAX : (07) 725-8204

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