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雷射顯微細胞組織擷取技術已
是目前分子醫學研究上,在細胞擷取上的重要技術。應用此技術,可快速與精準的取得大量純化的有效樣品,供研究診斷人員,做出有意義的診斷分析。在
genomics,gene expression,
molecular biology,micro-array,
biochips, proteomics
等研究,更是重要。
經由多年的技術演進,雷射顯微細胞組織擷取技術已經不再只單純的利用雷射去進行樣品的分離為滿足。雷射技術的進步與光學設計的推展,雷射顯微細胞組織擷取技術更經常被使用於移除組織與分離組織的實驗上。真正讓研究者得以利用LMD的雷射系統在小的個體如Drosophila或是C.
elegant中去進行所謂的微型手術
(Micro-Surgery),甚至是單一細胞內的微型手術。如此一來,也將雷射顯微細胞組織擷取技術的應用擴充到發育學,神經科學,與遺傳學等等過去未能使用雷射顯微細胞組織擷取技術的領域中。
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因應此技術與應用需求,
在系統設計上,必須能達到超高速與精確的樣品擷取功能,Leica
在過去的 AS LMD 研發基礎與渾厚的光學影像技術下,
於 2008年起,
推出新一代的 LMD 6500/7000,
此系統是全世界唯一自行從顯微鏡開始到系統的軟硬體設計整合的光學廠,
自行獨家完成的完美系統整合。在台灣,已有台大,陽明,成大,三總,榮總,國衛院,中山大學等單位,
相繼使用
AS
LMD,成效良好。 |
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Leica
LMD
6500/7000
為LEICA第三代的雷射顯微細胞組織擷取系統 (
Laser
Micro-
Dissection
System
),是微電腦全自動控制的雷射顯微細胞組織擷取系統。具有以下的幾點特性:
·
雷射移動,取樣最精確,速度最快,切割取樣操作最簡易.
·
重力取樣,簡單無污染,所需耗材最低。
·
採用新一代固態二極體
DPSS
UV
雷射,
穩定度高,壽命長,使用成本最低,
最合符投資使用效益。
·
特殊光路設計,可調整功率,重複率,光圈與對焦面,得以應付最多樣化的樣本與最多的應用項目。
·
具有Leica專為LMD系統設計的Smartcut 專用物鏡,不僅保留螢光與可見光的優良成像品質,更進一步提高雷射通透率,增加取樣效率。搭配獨家UVI 150x物鏡,可取得最微小的樣品。
·
具有活細胞擷取,Lab on Chip模組。
·
具有功能完善的軟體, 具有樣品自動辨識功能,自動切割擷取,從單一細胞到大量細胞的擷取,皆可輕易達成。
·
採用最高階的
DM
6000
B
正立微電腦控制顯微鏡,配有螢光模組。唯一可以同時觀察到螢光影像與切割過程的LMD系統。
雷射模組是LMD的心臟,延續
著AS
LMD
與LMD6000的優良傳統,
採 用獨家新一代的固態紫外光雷射
(
UV
Laser
),大幅提高雷射的穩定度與使用壽命。Leica
LMD
6500/7000系統秉持光學大廠對光學的堅持,首創以移動雷射的光路達到更精確的雷射切割。Leica
LMD
6500/7000採用重力取樣,思法大自然,無需額外的輔助器材與設備,也將使用LMD系統所需的耗材減少至最低。完成切割取樣的樣品會依重力掉落方式,
掉落到指定的
PCR
(
RT-PCR
)
蓋子上,整個樣本收集的過程,無接觸,無污染,最有利於後續的生化或是分生分析。也因為採用重力蒐集樣本,無額外耗材的產生,使用上最簡單,是最省時與最節省使用成本的系統。
同時,也是使用效益最高的系統。
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不同於其他雷射切割/擷取的系統,必須移動載物台來完成物件切割,提高了Leica
LMD
6500/7000的切割準確度最高至0.07um,遠高於電動載物台所能提供的最高1um的精密度。
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Leica
LMD
6500/7000配備所有LMD產品中最高功率的雷射,可以穿透堅硬的硬組織與vibratom切片等以往不易使用雷射切割達到分離的樣本。也因為有高功率雷射,在活細胞的擷取上更是遊刃有餘。 |
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LMD Laser Systems |
Leica LMD7000 (SpectraPhysics) |
Leica LMD6500 (Crylas) |
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雷射形式 |
Nd:YLF Neodymium, yttrium lithium fluoride |
Nd:YAG Neodymium, yttrium aluminium garnet |
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波長 |
349 nm |
355 nm |
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最大脈衝能量 |
120
mJ
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50
mJ |
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重複率(Repetition rate) |
1 – 5000 Hz |
80 Hz, fixed |
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控制雷射光圈 |
Yes |
Yes |
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近年來,雷射切割在應用的層次上逐漸的擴充,有各式各樣不同的樣本都希望可以藉由雷射顯微細胞組織擷取系統來達成樣本的分離或是去除。為了因應多樣化的樣本,
Leica
LMD
6500/7000不僅在雷射功率上提供最大的強度,可調整的雷射功率,利用雷射光束口徑與焦距的精密控制,以及可調整的雷射重複率(repetition),Leica
LMD
6500/7000將單一的雷射變化出不同粗細的切割線與功率,雷射的單一脈衝所帶來的切割速度與功率也得以有所變化。
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樣本的不同需要不同功率與強度的雷射來達成分離取樣的目的與,如同外科手術需要使用各式各樣的手術刀一般,Leica
LMD
6500/7000透過光學的系統將單一雷射變化成不同的切割工具以因應各式各樣的樣本。
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為了達到有效率的UV雷射使用率,避免雷射光在穿透一般物鏡所造成的損失與傷害,Leica透過百年的光學造詣,獨家設計出一系列最適合LMD的SmartCut鏡頭。獨家
LMD
專用 SmartCut
UVI-鏡頭涵蓋了不同的倍率
(6.3x,
10x,
20x,
40x,
63x,
100x.
150x
)。
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Leica
HCX
PL-Fluotar
UVI
6.3x/0.13
SmartCut
Objective
Leica
SmartCut
UVI
6.3x
物鏡,具有UV高穿透性,大量及大面積的樣品擷取用。
可適用冷凍或石臘包埋的組織,極厚的樣品也可輕易使用。
Leica
HCX
PL
Fluotar
LWD
40x/0.60
CORR
PH2
XT 0-2
/ C /
0.22,
Objective
Leica
SmartCut
UVI
40x
的物鏡是最普及與標準的物鏡,適用於微小及大量的樣品切割擷取,也適用於
laser
ablation
的應用.。雷射切割線可細到2
微米
( µm
)。
Leica
HCX
PL
Fluotar
LWD
63x/0.70
CORR
PH2
XT /
0.1-1.3
/ C
1,63-2,83
SmartCut
UVI
63x
物鏡對
UV
有極高的穿透性,
具有高解析的長工作距離特性,
可應於
5 -20µm
樣品,
雷射切割線可細到
1 微米
(
µm
).
Leica
HCX
PL
Fluotar
150x/0.90
0/C
特殊的
SmartCut
UVI
150x
物鏡, 可提供切 割線寬細至小於
1 微米
(
µm
),
足以應用於任何微小樣品的切割取樣.
例如
Chromosome
或 Single
Astrocytes.
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整合度高的AVC (Auto Vision Control)軟體,提供可見光與螢光下皆可使用的細胞自動辨識系統。無需額外開啟不同軟體,並切換於切割軟體與辨識軟體中。在Leica
LMD的樣品自動辨識的影像處理協助下,
輕輕按一下滑鼠,即可自動掃描切割樣品邊緣。
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進一步,AVC軟體的優點不僅僅是高度的整合於Leica
LMD系統之中,更重要的是在蒐集樣本的過程中,他簡化了使用者的操作,降低了操作的負擔。因為藉由LMD需要蒐集的樣本數目隨著分析的方法不同而有所改變,可能是得以利用PCR去增加訊號的單一細胞即可,或是需要蛋白質分析的上千顆細胞。當所需樣本數目增加,操作的困難度便增高。也因此,AVC的細胞自動辨識變得以在此發揮,讓使用者有一個輕鬆的使用環境以進行後續的分析實驗。
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Leica
LMD
6500/7000不僅僅是一台雷射切割擷取系統,還是一台自動化的顯微影像系統。Leica
LMD
6500/7000也是業界中唯一搭載正立螢光顯微鏡系統的雷射顯微細胞組織擷取系統。獨家的設計有其縝密的無污染考量,樣本擷取巧妙的利用大自然的重力,無需額外的蒐集光壓或是沾黏裝置。Leica全自動的螢光DM6000B正立顯微鏡不僅提供功能強大的雷射切割擷取功能,它同時還提供:
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不僅如此,Leica為了其LMD量身打造的特殊光路設計,不佔用顯微鏡原本的螢光光路,讓使用者可以方便的再使用螢光樣本切割的同時,一併觀察螢光樣本訊號與切割程序,無須轉換任何光路與顯微鏡的調整。
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除此之外,Leica為了有效發揮此點功能,設計了專為綠色螢光蛋白(GFP)使用的濾鏡,有效的保留了綠色螢光蛋白所需要使用的螢光波長,更進一步加強了UV雷射的穿透效果。高度的整合設計,帶給使用者操作上的便利,並兼顧過程的準確性。
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Leica
LMD
6500/7000的雷射光完全沒有碰到樣品本 身,也不會產生高熱影響樣品。
切割與取樣一次完成,完全無接觸污染。最後總結,Leica
LMD
6500/7000的雷射切割擷取系統,為雷射功率最強,應用樣本最廣泛,耗材最節省的雷射切割擷取系統。不僅於此,無接觸,無污染的重力取樣與移動雷射光切割所帶來的高精準度與速度,也減低了使用者操作Leica
雷射切割擷取系統時的負擔。如同使用 Leica
LMD
6500/7000的雷射切割擷取系統不僅僅可以用於切割,更可用於移除,抹去組織一般。
Leica
LMD
6500/7000雷射切割擷取系統也不僅僅是一台雷射切割擷取系統,更是一台全自動的正立螢光顯微鏡。透過細節的設計與介面的整合,帶給使用者更完善的功能與使用感受。
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相關資料 ( Information ) |
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| Protocols
( 相關應用資料參考 ) |
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RNeasy
Micro Kit
For isolation of
concentrated total RNA from
small amounts of tissue or
small numbers of cells [more] |
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QIAamp
DNA Micro Kit
For purification of genomic
and mitochondrial DNA from
small amounts of fresh or
frozen blood, tissue,
forensic samples, and dried
blood ... [more] |
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QIAGEN
Reverse Transcriptases
QIAGEN Omniscript and
Sensiscript Reverse
Transcriptases are unique
recombinant enzymes with a
high affinity for RNA,
providing highly specific
and sensitive ... [more] |
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HotStarTaq
DNA Polymerase
HotStarTaq DNA Polymerase, a
modified form of QIAGEN Taq
DNA Polymerase, provides
high specificity in
hot-start PCR. [more] |
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QuantiTect
PCR and RT-PCR System
QIAGEN QuantiTect PCR Kits
(for PCR and two-step RT-PCR)
and QuantiTect RT-PCR Kits
(for one-step RT-PCR)
provide accurate real-time
quantification of ... [more] |
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更多的物鏡供選用
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UVI
6.3x / 0.13 Microdissection |
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HC PL FLUOTAR
10x / 0.30
/ Coverglass: - / ICT upright: K2+D1
/ ICT invers: S1=K11,S23=K3(K11),
S70=K6(K3),Obj.=D1(D) ICR: D1(D)
/ thread: M25 / FWD: 11.0 |
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HCX
PL FL L 40x/0.60 CORR TX 0-2/C,
0.22,
Objective |
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HCX APO
100x / 1.30 Oil
U-V-I / Coverglass: 0.17 / ICT
upright: K4+D or K9+D
/ ICT invers:
S1=K4-K12,S23=K10,S70=-,Obj.=D / ICR: D(D1) / thread: M25 / FWD: 0.12 |
|
HCX PL FL L
63x / 0.70 CORR XT |
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HCX PL FL L
63x / 0.70 CORR PH2
0.1-1.3/C
1,63-2,83 |
|
HCX PL APO U-V-I
40x / 0.75
Coverglass: 0.17 / ICT upright:
K3+D(K6+D1) / ICT invers:
S1=K3(K6),S23=K6(K8),S70=K8,Obj.=D(D1) / ICR:
- / thread: M25 / FWD: 0.28;with high
transmission in UV, visible and IR light |
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HC
N PLAN L 20x / 0.40 CORR 0-2/c |
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HCX
PL FL L 40x / 0.60 CORR TX 0-2/C,
0.22,
Objective |
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HCX PL FLUOTAR
150x / 0.90 0/C |
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HC
C PLAN 4x / 0.10
/ Coverglass: - / ICT upright: - /
ICR: - / thread: M25 / FWD: 26.2 |
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Laser
Illumination & Ablation System |
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回
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