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了解 Leica 在
Super-Resolution 的解決方案 與 領導趨勢 .. |
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多一點了解 Leica
TCS SP5 的卓越, 與其他產品的差異性在哪裡 ? |
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全世界市佔率最高的 白光雷射共軛焦顯微鏡系統 .... Leica TCS SP5 X.
可滿足目前與未來所有螢光染劑激發所需的雷射光源. |
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全世界唯一同時具有連續可調的白光雷射 (激發光光譜) 及 連續可調的分光裝置 ( AOBS ), 才足以讓
White Light Laser ( 連續可調白光雷射 ) 的安置, 顯得有意義, 也足以發揮功效. 搭配 TCS
SP5 的連續可調分光偵測系統, 成就出今天與明天的共軛焦影像需求 !真正可以對各種染劑所需的最佳激發光譜,
利用連續可調的白光雷射調節選出特定的最佳激發波長. 可以滿足所有螢光染劑與樣品的應用., 可創造出難以想像的科研成果
!!!
也唯有全世界唯一的
LEICA TCS SP5 X 共軛焦顯微鏡系統, 才是唯一登峰造極的設計 !!! |
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LEICA TCS SP5 X
劃時代的雷射光源---白光雷射 (White
Light Laser)
470-670
nm
( 1 nm 解析 ) 的 連續可調激發光雷射 |
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身為實驗研究人員的您是否常遇到所使用的螢光物質與共軛焦系統上所搭設的雷射波長不完全相符時，只好使用波長相近的激發光用，並加大其雷射強度?這個折衷的法子固然好，但卻容易造成螢光物質快速消褪，且對活細胞有所傷害。甚者，在今日共軛焦系統多為共同使用，各實驗室有自己慣用的螢光物而與他人不同，所以一套共軛焦系統所搭配電射光模組很難滿足所有的使用者。因此，是否有一個辦法能使螢光染劑的使用上不再受限於有限的電射激發波長?
這個問題隨著白光雷射的問世得到了最好的解決方案---徠卡 SP5X 共軛焦系統所搭配的白光雷射能提供 470-670 nm 的激發光範圍內，調整激發光源至 1nm 的精度，於是我們如今能選定最佳的波長來促使螢光蛋白激發。這如同打開收音機收聽電台頻道一樣，轉動旋鈕就可收聽每一個頻道；同樣地在白光雷射透過 AOTF 可調節出任何想要的激發波長
( Tunning into any excitation ! )
，您可以百分之百準確使用染劑的最佳吸收波長予以激發，今後在實驗設計上便能隨心所欲地選用螢光標示物，不在受限於激發源。此外，使用者更可同時使用八個不同的波長來激發多重螢光處理的樣品，真正充分使用可見光譜內的所有螢光波段以及將多重螢光技術發輝到極致!
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CY2, exc 491 nm, emis 499-505 nm /
NMDA Receptors |
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Lp, exc 474 nm , 509-514 nm,
/ beads in vacuols |
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Acridine Orange,484 nm, emis
520-532nm, Nucleus |
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Cy3 , exc 551 nm, emis 555-575nm,
Gaba-B-R1 Receptors |
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TexasRed, exc 562 nm, emis 605-612
nm, / Vacuoles and endosoms
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ALEXA 594, exc 594, emis 615-625nm,
nuclear and cellular membrane |
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ALEXA 633, exc 633nm, emis
655-665nm, Clathrine vesicles |
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CY5, exc 640 nm, emis 661-675nm,
/ Cilia |
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LEICA TCS SP5 X
白光雷射的八大特點： |
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一、白光雷射:系由單一窄波段之高密度(GigaWatts/cm2)、高頻(80MHz)光束通過內含極細直徑2微米所構成的纖維束時，波長範圍被放寬至470-670nm
(1-3mW/nm)
的連續可見光束，因此稱之為「白光」雷射 |
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二、白光雷射透過AOTF篩選後可提供可見範圍內任意波長之雷射激發光，其選取的精度可達到1nm。於是使用者可以給與螢光物質最佳的吸收波長，收集最多的螢光訊號，因此一來就能降低雷射能量避免螢光物質快速消褪
(photobleaching)和對細胞的光傷害(photodamage) |
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三、有時當我們所使用的螢光物質其激發光與釋放光譜太過於接近，容易收集到反射回來的激發光子，以致於不能用最佳吸收波長予以激發，而需要用往藍光波段略微調整波長時，我們就可以利用白光雷射可自由地選取波段的優點，來找尋最適當的激發波長，並利用AOBS和SP
detector來過濾並收集更大範圍的釋放光譜 |
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四、更常遇到的狀況是在做多重螢光時，單一雷射光同時激發兩個吸收波長相近的螢光物而造成相互干擾(cross-excitation)的現象。這時應當運用白光電射的可微調功能找出適當的波長使用，並利用 AOBS 和 SP
detector 來過濾並收集有效的釋放光子以降低干擾訊號。 |
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五、當螢光物質可能因細胞內微環境的影響(如：pH值、Ca2+濃度) 而改變了它的激發光譜，此時也可容易地調整白光雷射的激發光波長。 |
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六、FRET
(Forster Resonance Energy Transfer)是用來測定分子間距離與互動的新穎技術。而 FRET
AB(Acceptor-Bleaching) 則是常用的分析模式之一，其原理在於---進行光漂白(photobleaching)前，提供子(donor)的螢光能量會有一部份轉移到接受子(acceptor)身上，稱之為FRET---但在高量雷射破壞接受子後，FRET現象不復存在，所以提供子的螢光強度會在光漂白後增強。然而我們往往在進行光漂白接受子的同時也激發了提供子因此造成後者的損傷，所以沒有得到提供子螢光增強的結果。現在有了白光雷射便可精準地調整出適當激發光進行光漂白，此時得到的實驗數據更能呈現FRET成果! |
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七、利用白光雷射可提供全波段光源的特性，我們得以逐步改變激發波長來測量所使用螢光物的最佳激發值，而不單單只是照著製造商所給的建議值，尤其是當使用者的實驗環境條件不同時(如第五點所述)，可以找到最適合自己實驗的激發波長 |
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八、承前一點所述，既然白光雷射可以做激發光全波段掃描，那麼再搭配徠卡特有的 SP
detector 來偵測各釋放光波段的讀值，我們就能輕易得到一份激發光對應釋放光波長的分析圖譜，提供更多生物研究資訊 |
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The
supercontinuum laser ( white laser system with
AOTF ) and AOBS are a perfect match ! Full freedom
of a white light laser could only be realized with
the AOBS ( The unique spectral separation
solution from Leica ). The Leica TCS SP5 X save
experimental time to focus more on data analysis
..................... Prof. Alberto Diaspro (
University of Genoa, Italy )
With the TCS SP5 X we are
solving problems we did not know existed ..... Dr.
Kees Jalink ( The Netherlands Cancer Institute,
The Netherlands ) |
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結語：
徠卡在研發科技上總是引領著世人往前邁進，在此推出新一代的白光雷射又再次證明它是雷射共軛焦系統永遠的領導者。今日在徠卡
SP5X 系統上，結合連續可見光範圍的白光雷射、可調整激發波段的 AOTF、可有效過濾反射光子的
AOBS、以及可自由收集釋放波段的
SP detector。於是乎在整條光路上的每個重要環結都能夠針對使用者的需求做最佳化的設定，這是唯一真正全調整式的共軛焦系統，滿足您的每一份要求。 |
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LEICA TCS SP5 II ( X :
with White Light
Laser System ) 圖示 |
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相關資料 ( Information ) |
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雷射掃描共軛焦顯微鏡技術概論與應用介紹 ( CLSM
Technology & Application ) |
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( AOTF, AOBS, Spectral Detector ) |
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Leica TCS 光譜式共軛焦顯微鏡的雷射光源 (
Laser system ) 介紹 |
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Objectives ) 介紹 |
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Application Software ) 介紹 |
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使用於共軛焦顯微鏡上的活細胞培養設備 (
Micro-incubation ) |
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