美嘉儀器股份有限公司

LCS Multi-Color

共軛焦螢光交互重疊分析軟體

當使用兩種螢光染劑以上的顯微鏡螢光技術, 經常遭遇螢光交互重疊的訊號干擾. Leica Multi-Color 採用所謂的 Cytofluorogram 方法, 可輕易的分析分離出螢光間的交互重疊現象 ( 2D, 3D ), 並可以量化螢光訊號.

Leica Multi-Color 應用領域 :

1. Determine and visualize co-localization of different dyes ( and Living color proteins, GFP )

2. Segmentation based on multi-channel properties.

3. Correct for Cross-Talk ( Bleed through )

4. Densiometric analysis

5. Supports up to 3 fluorescence channel ( 3D cytofluorogram )

以圖示解說 Leica Multi-Color 技術 :

以擷取的螢光影像產生螢光交互重疊干擾 : Cross-Talk & Co-localization		以 Leica Multi-Color 的 Cytofluorogram 方法量化分離 ( 2D / 3D )		得到最佳多重螢光影像

Leica Multi-Color

技術原理

ØEstimation of Mixture Density from frequency (Binning)

ØØSame principle as histogram function in quantification

ØØVisualization as standard images and as 3D Scatter plot


2D cytofluorogram	3D cytofluorogram	3D view

Densitometric and Area Analysis of segmented (white) pixels	Measurement of Co-localisation	果蠅 : 3D 動態螢光影像, 無螢光交互重疊, 無 Co-localization 干擾.

左圖 :

縱軸座標 : 紅色 ( Rhodamine )

橫軸座標 : 綠色 ( FITC )

黃色區域 : 代表螢光 Co-localization

量化及圖示 Cytofluorogram, 輕易分離重疊的影像.

	2 independent structures ( Patterns )
	2 independent structures with Cross-Talk
	3 structures with cross-talk and co-localization.

Leica Multi-Color 軟體提供 2D, 3D cytofluorogram 量化分析功能, 包括統計分析, 圖示, 影像處理分離.

可做局部量測分析

相關詳細資料, 請洽本公司共軛焦小組

其他共軛焦影像的多重螢光影像重疊分離處理

使用者必須有完善的樣品自備, 螢光染色標定方法, 慎選配對的多種染劑, 盡量讓釋放光譜 ( Emission spectrum ) 分離愈遠愈好. 當然, 在影像擷取的技術上, 也要注意一些硬體的規劃, 如, 激發光源, 光源強度, 光源波長, 分光濾鏡, 接收螢光的濾鏡 ... 等.

建議採用 Leica TCS 系列 ( TCS SP2 AOBS, TCS SP2, TCS SL ) 的光譜式共軛焦顯微鏡, 能克服多重螢光影像擷取的困擾

AOTF		可針對所用染劑, 精確選擇雷射波長, 控制雷射強度. 取得最佳激發光源, 得到最佳染劑激發效果 ( Excitation )
AOBS		全世界獨一的可程式分光調控設計 ( Beam splitter ). 提供使用更多波長的雷射, 可使用更多的染劑, 提供最有效的分光效果, 達到最佳的螢光訊號擷取, 最佳重疊螢光分離.
SP ( Multi-Band Spectrophotometer - Detectors )
	連續調控每個感測器的螢光接收範圍, 提供無限制的光譜設定, 可以取得更佳的螢光訊號, 可以達到最佳的螢光訊號擷取, 最佳重疊螢光的分離.