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三維冷凍電子斷層掃描工作流程解決方案

LEICA 提供專用的Coral Cryo 3D CryoET工作流程解決方案，可確保樣本活性、進行品質檢查，重要的是確保三維目標定位機制精准可靠。
 
STELLARIS 5 Cryo 可從空間與時間的解析來精準確認與定位樣本, 包含冷凍台 和 傳送梭，旨在配合先進的 CryoET 目標定位軟體 (LAS X Coral Cryo)，以及適用於冷凍聚焦離子束(FIB)或真空冷凍傳送(VCT)載物台的各種無縫集成和傳送選項。
 
通過無縫銜接的樣本製備工作流程提高工作效率。
 


LEICA 提供冷凍電子斷層掃描的樣品製備解決方案, 從通過高壓冷凍將樣品玻璃化, 以冷凍聚焦離子束研磨或冷凍超薄切片術稀釋樣品, 再通過冷凍螢光顯微鏡 或 共軛焦掃描, 鑒定出感興趣的區域. 進一步做 Cryo ET冷凍電子斷層掃描與3D重建.

TauSense 技術, 可發現更多奧秘的潛力

我們在STELLARIS 5 Cryo內採用獨有的 TauSense 技術，使您能夠從每個樣本中提取額外的一層資訊，提升您所做研究工作的科學影響力。除了光譜顏色資訊外，還可以觀察光子的平均到達時間。這些資訊可以用來發現隱藏的組分，只需瞭解不同的螢光壽命即可(TauContrast)。 由於冷凍工作流程（如Coral Cryo）中的深部溫度，螢光團的發射和激發視窗趨於一致。由於平均光子到達時間不同，TauSense使您可以將重疊的螢光團分離。




在所有冷凍工作流程中，一旦樣本被玻璃化，就需要將樣本保持在完全除濕和極低溫條件下。
 
我們創新性的冷凍顯微成像套件配備冷凍台和傳送梭，可以確保安全、直觀地進行樣本裝載和直接傳送，同時始終保持標本的安全冷凍條件。冷凍台使您能夠在穩定的冷凍條件下進行光學顯微成像，同時通過保持氣態氮對周圍空氣的恒定輕度過壓，允許所有必要的運動以實現超解析度的三維成像。
 
為了使樣本在裝載過程中更加安全，可選擇在裝載過程中使用一個承載傳送梭的蓋盒，以確保在所有條件下安全裝載，從而提供額外的程序控制並延長安全裝載時間窗。



LEICA CryoET 方案, 提供樣品製備外, 更可在光鏡與電鏡之間精準的轉移樣品。
CryoET 技術，對感興趣的生物分子進行特定的螢光標記，然後首先將樣品通過冷凍螢光顯微鏡成像以確定感興趣區域，聚焦離子束 恰好在感興趣區域處用於在樣品中創建薄切片，並將樣品轉移到冷凍電鏡中進行高解析度成像。這種方法已成為冷凍電子斷層掃描的黃金標準，因為它能產生與螢光顯微鏡高度相關的高解析度電鏡資料，而冷凍條件使樣品保持在接近自然狀態。


LEICA 的 LAS X Coral Cryo 軟體：
基於插值的三維目標定位，在x和y方向對切片進行多層掃描 ( Z-stack )。這些標記可在所有相關視窗中互動式移動。
 
可靠的靶向精准度
 
對於相關的工作流程，至關重要的是檢索冷凍光學顯微鏡下識別的確切靶點座標，因為螢光信號在隨後的電子顯微鏡步驟中不可見。因此，具有獲取開放格式座標的STELLARIS 5 Cryo顯微鏡中進行目標定位，以提高系統的互通性。
 
易於使用的 LAS X Coral Cryo 軟體模組可滿足這些需求，它具有基於插值的創新性三維目標定位功能，能夠在納米尺度上精准定位開放格式的座標標記。不同的標記類型提供不同的功能，還可用於標誌、薄片和螢光珠標記。



STELLARIS 5 可以搭載 使用 LIGHTNING 可從樣本中獲得豐富的資訊,  Power HyD 探測器系列、優化的光束路徑 與 白光雷射器 (WLL) 相結合，使您能夠獲得更準確、可靠的資料。
 
運用獨特的 LIGHTNING 檢測理念，盡可能地從您的玻璃化冷凍樣本中提取資訊，獲得對科學問題的深入解答。 這是一個自我調整的資訊提取過程，可以呈現圖像資訊中原本不可見的精細結構和細節。因此，您可以在電鏡顯微成像工作流程的後續步驟中更精准地定位感興趣的結構。


上圖 :
HeLa细胞显示Hoechst（蓝色，细胞核），
Mitotracker Green（绿色，线粒体）、
Bodipy（红色，脂滴）、
荧光珠（品红色，1微米），
反射（白色）。
比例尺10微米

您可以信賴的性能

在冷凍電子顯微鏡中，必須在整個工作流程中監測冰層厚度，而且越早檢查和評估越好。如果冰層太厚，會在打磨階段造成問題，而如果冰層太薄，又可能會影響樣本的穩定性。
 
STELLARIS 5 Cryo提供了兩種冰層檢查模式：快速攝像概覽和共聚焦反射模式，以三維方式確定冰層厚度。
 
開發Cryo CLEM物鏡HC PL APO 50x/0.90是為了滿足冷凍光學顯微成像的特定需要，為您提供超解析度的優勢，同時又不需要浸液。


冷凍電子斷層掃描最初主要用於結構生物學，但是由於最近的技術進步，它已成為功能強大的工具，廣泛應用於微生物、神經生物學、免疫學、細胞生物學、發育生物學和分子生物學等廣泛的研究領域。
 
微生物學
使用冷凍電子斷層掃描視覺化細菌中的病毒感染。例如，通過使用冷凍電子斷層掃描，研究人員可以重建感染不同階段的病毒結構。使用冷凍電子斷層掃描來表明病毒在細菌中創建了核樣結構，以保護自己免受防禦機制的攻擊。

神經生物學
使用冷凍電子斷層掃描視覺化導致神經退行性疾病的蛋白質聚集。傳統的神經元細胞樣品製備方法無法進行高解析度成像，但是通過使用冷凍電子斷層掃描，研究人員能夠視覺化與亨廷頓氏病和側索硬化相關的聚集體。

免疫學
使用冷凍電子斷層掃描研究與HeLa細胞結合的HIV-1顆粒的結構，揭示它們的相互作用。

細胞生物學
冷凍電子斷層掃描已用於通過膜接觸位點闡明不同細胞內膜系統之間的連接。來自冷凍電子斷層掃描的高解析度3D重建技術可以研究參與不同細胞器之間這些罕見接觸的分子。
冷凍電子斷層掃描目前已有允許經典模型生物（如C. Elegans和D. Melanogaster）的新方案被開發。

分子生物學領域
使用冷凍電鏡純化的蛋白對Cas9作用機理的重要結構細節。通過使用冷凍電子斷層掃描將CRISPR-Cas9原位捕獲，使這項研究進一步發展，將極大地幫助優化這一著名的基因編輯系統